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Mayta's Blog

Autor: Química Ma. Cristina Cóndor G

De: Universidad Central del Ecuador

TÉCNICA DE ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO

E. COLI Y COLIFORMES TOTALES PETRIFILM AOAC 991.14 Y AOAC 998.08

ALCANCE

Cárnicos (AOAC 998.08)

Vegetales, frutas, superficies vivas, superficies inertes y agua (AOAC 991.14)

PRINCIPIOS

En la técnica de análisis microbiológico E. coli y Coliformes totales Petrifilm 3M las placa contiene (nutrientes de bilis rojo violeta VRB) cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolio, indicador de actividad glucoronidasa y un tinte indicador que facilita la enumeración de las colonias, que forman un precipitado azul alrededor de las colonias de E. coli. Además la placa contiene un agente gelificante soluble en agua fría, y una película que atrapa el gas producido por las E. coli en la fermentación metabólica de la lactosa. A su vez las colonias de Coliformes durante su crecimiento van generando ácido, por lo que el indicador de pH va oscureciendo el color del gel y el gas producido es atrapado por la película alrededor de la colonia al igual que en las colonias de E. coli.

TOMA DE MUESTRAS:

 VEGETALES, FRUTAS, SUPERFICIES VIVAS, SUPERFICIES INIERTES y AGUA: Muestrear como se indica en NTE INEN 1529-2:2013 Control microbiológico de los alimentos. Toma, envío y preparación de muestras para el análisis microbiológico.

CÁRNICOS: Muestrear como se indica en NTE INEN 776:2013 Carne y productos cárnicos. Muestreo

PREPARACIÓN DE MUESTRAS

 Previo: Agua de peptona tamponada (APT): Preparar como se indica en la etiqueta del fabricante.

Recuerde: Encender el mechero 30 minutos antes de empezar todo el proceso.

 VEGETALES/ FRUTAS 

  1. Homogenizar la muestra.
  2. Pesar 10 g de muestra y diluirla con 90mL de APT (Agua de peptona tamponada u en otro diluyente recomendado por el fabricante de las placas petrifilm).
  3. Si son muestras con corteza de fácil desprender, pelarlas y pesar 10g de corteza y proceder igual que en paso 2.
  4. Agitar por 15 segundos la dilución madre (1:10).
  5. A partir de la dilución madre 10-1 realizar las diluciones necesarias trasvasando 1mL de dicha dilución a tubos con 9mL de APT.

CÁRNICOS

  1. Homogenizar la muestra.
  2. Pesar 10 g de muestra y diluirla con 90mL de APT.
  3. Agitar por 15 segundos la dilución madre (1:10).

A partir de la dilución madre 10-1 realizar las diluciones necesarias trasvasando 1mL de dicha dilución a tubos con 9mL de ATP.

AGUA

  1. El agua se tomará 1mL y se lo siembra directo sin dilución.

SUPERFICIES VIVAS E INERTES

  • Tomar las muestras en un área de 10cm2, mediante un hisopo, sea húmedo o seco, según la necesidad.

 

muestreo por hisopo
Muestreo por hisopo
  1. En el hisopo Quick Swab se puede adicionar hasta 3mL más de agua de peptona.

USO DE LA PLACA E. coli y Coliformes totales

INOCULACIÓN

  1. Preparar e identificar el número de placas necesarias para el análisis (revisar Guía de Interpretación Recuento de E. coli y Coliformes totales).
  2. Colocar 1mL de la muestra previamente preparada sobre la placa petrifilm levantando la película protectora y luego de inocular, bajar con cuidado dicha película evitando la formación de burbujas, si es necesario utilice el dispersor. Se pueden apilar máximo 20 placas.
  3. Realizar la siembra por duplicado.

INCUBACIÓN

 Cárnicos: se incuban por 24hrs (±2hrs) a 35ºC (±1ºC) Según AOAC método oficial 998.08.

Vegetales, frutas, superficies vivas, superficies inertes y agua: se incuba por 48hrs (±2hrs) a 35ºC (±1ºC) Según AOAC método oficial 991.14.

 INTERPRETACIÓN

 Todas las colonias azules asociadas con gas corresponden a E. coli, y a Coliformes totales son la suma de todas las colonias rojas y azules asociadas con gas (revisar Guía de Interpretación Recuento de E. coli y Coliformes totales).

CÁLCULOS

Según “La Guía de Interpretación Recuento de E. coli y Coliformes totales”

Recuerde:

Área de la placa: 20cm2

La máxima capacidad de los hisopos  Quick Swab son 4mL

Diluciones para hisopos quick swab
Diluciones para hisopos quick swab

CONVERSIÓN DE RESULTADOS DE LA PLACA PETRIFILM A NMP

Transformación de UFC a NMP
Transformación de UFC a NMP


BIBLIOGRAFÍA

  • NTE INEN 1529-2:2013 Control microbiológico de los alimentos. Toma, envío y preparación de muestras para el análisis microbiológico.
  • NTE INEN 776:2013 Carne y productos cárnicos. Muestreo.
  • AOAC método oficial 998.08 y AOAC 991.14
  • Guía de Interpretación Recuento de E. coli y Coliformes totales.
  • Australian Government Department of Agriculture 2015/06/15. E. coli petrifilm-AOAC 991.14 and AOAC 998.08.
  • Microbiología Alimentaria Anderson Pascual, Calderón María del Rosario y Pascual Vicente, 1999, España, 2da edición.

♥En el amor de nuestro Señor Jesucristo, anhelo que esta recopilación de información incluyendo el conocimiento adquirido, sea de bendición para tu vida♥

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