Mayta's Blog

AUTOR: Química Ma. Cristina Cóndor G

De: Universidad Central del Ecuador

TÉCNICA DE ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO

CONTAJE DE AEROBIOS EN PLACA (PETRIFILM  METHOD) AOAC 990.12

ALCANCE

Cárnicos, vegetales y frutas

Ambiente y superficies

PRINCIPIOS

En la técnica de análisis microbiológico Contaje de Aerobios en Placa (CAP) 3M Petrifilm la placa contiene nutrientes y 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride como un indicador de crecimiento bacteriano. La reducción del triphenyltetrazolium por las bacterias resulta la coloración roja de las colonias. Las placas son hidratadas con la muestra y agentes gelificantes que causan la solidificación del medio.

TOMA DE MUESTRAS:

VEGETALES, FRUTAS, SUPERFICIES VIVAS, SUPERFICIES INIERTES y AGUA: Muestrear como se indica en NTE INEN 1529-2:2013 Control microbiológico de los alimentos. Toma, envío y preparación de muestras para el análisis microbiológico.

CÁRNICOS: Muestrear como se indica en NTE INEN 776:2013 Carne y productos cárnicos. Muestreo

AMBIENTE: Muestrear como se indica en “La Guía para recuento de mohos y levaduras” monitoreo ambiental.

PREPARACIÓN DE MUESTRAS

Previo: Agua de peptona tamponada (APT): Preparar como se indica en la etiqueta del fabricante.

Recuerde: Encender el mechero 30 minutos antes de empezar todo el proceso.

VEGETALES / FRUTAS

1. Homogenizar la muestra.
2. Pesar 10 g de muestra y diluirla con 90mL de APT (Agua de peptona tamponada u en otro diluyente recomendado por el fabricante de las placas petrifilm).

3. Si son muestras con corteza de fácil desprender, pelarlas y pesar 10g de corteza y proceder igual que en paso 2.
4. Agitar por 15 segundos la dilución madre (1:10).
5. A partir de la dilución madre 10^-1 realizar las diluciones necesarias trasvasando 1mL de dicha dilución a tubos con 9mL de APT.

 CÁRNICOS

1. Homogenizar la muestra.
2. Pesar 10 g de muestra y diluirla con 90mL de APT.
3. Agitar por 15 segundos la dilución madre (1:10).
4. A partir de la dilución madre 10^-1 realizar las diluciones necesarias trasvasando 1mL de dicha dilución a tubos con 9mL de ATP.

SUPERFICIES VIVAS E INERTES

• Tomar las muestras en un área de 10cm², mediante un hisopo, sea húmedo o seco, según la necesidad.

 

2. En el hisopo Quick Swab se puede adicionar hasta 3mL más de agua de peptona.

AMBIENTE

1. Hidratar la placa con 1mL de APT 1 hora antes del uso.
2. Exponer la placa al ambiente que se desea muestrear, con la película protectora levantada.
3. Exponer la placa 15 minutos la ambiente, acabado el muestreo, bajar cuidadosamente la lámina. (pase a “INCUBACIÓN”)

USO DE LA PLACA CAP

INOCULACIÓN

1. Preparar e identificar el número de placas necesarias para el análisis (revisar Guía de Interpretación Recuento de Aerobios AC).
2. Colocar 1mL de la muestra previamente preparada sobre la placa petrifilm levantando la película protectora y luego de inocular, bajar con cuidado dicha película evitando la formación de burbujas, utilizar el dispersor de AC. Se pueden apilar máximo 20 placas.
3. Realizar la siembra por duplicado.

INCUBACIÓN

Se incuban por 48hrs (±3hrs) a 35ºC (±1ºC) Según AOAC método oficial 990.12.

INTERPRETACIÓN

 Todas las colonias rojas son contadas como Aerobios mesófilos. El rango recomendado en la Placa Petrifilm AC está entre 25-250 colonias.

(Revisar Guía de Interpretación Recuento de Aerobios AC).

CÁLCULOS

Según la NTE INEN 1529-5:2006 Control microbiológico de los alimentos. Determinación de la cantidad de microorganismos Aerobios mesófilos. Rep.

Recuerde:

Área de la placa: 20cm²

Área de la placa expuesta a muestreo ambiental: 40cm²

La máxima capacidad de los hisopos  Quick Swab son 4mL

BIBLIOGRAFÍA

• NTE INEN 1529-2:2013 Control microbiológico de los alimentos. Toma, envío y preparación de muestras para el análisis microbiológico.
• NTE INEN 776:2013 Carne y productos cárnicos. Muestreo.
• AOAC método oficial 990.12.
• Guía de Interpretación Recuento de Aerobios AC.
• NTE INEN 1529-5:2006 Control microbiológico de los alimentos. Determinación de la cantidad de microorganismos Aerobios mesófilos. Rep.
• Australian Government Department of Agriculture 2015/06/15. Aerobic Plate Count in Foods (Petrifilm Method) – AOAC 990.12.

♥En el amor del Señor Jesucristo, anhelo que esta recopilación de información tanto bibliográfica como adquirida durante mis estudios, edifique tu vida♥