Mayta's Blog

Salmonella spp técnica para la detección microbiológica en petrifilm / mayta

Autor: Ma. Cristina Cóndor G

Química de Alimentos de la Universidad Central del Ecuador

ALCANCE

Cárnicos, frutas y vegetales (aplicable para más alimentos)

PRINCIPIOS

En la técnica de análisis microbiológico Salmonella Express (salx) 3M, se proporciona la detección cualitativa y la confirmación bioquímica de Salmonella. El medio de cultivo cromogénico es selectivo y diferencial para Salmonella y el Disco 3M Petrfilm Salmonella facilita la confirmación bioquímica de las especies de Salmonella.

TOMA DE MUESTRAS:

 VEGETALES / FRUTAS: Muestrear como se indica en NTE INEN 1529-2:2013 Control microbiológico de los alimentos. Toma, envío y preparación de muestras para el análisis microbiológico.

 CÁRNICOS: Muestrear como se indica en NTE INEN 776:2013 Carne y productos cárnicos. Muestreo

PREPARACIÓN DE MUESTRAS

 Previo: Caldo base para Salmonella  (CB) y el suplemento para enriquecimiento de Salmonella.

Preparar como se indica en la etiqueta del fabricante.

Recuerde: Encender el mechero 30 minutos antes de empezar todo el proceso.

 CÁRNICOS / VEGETALES / FRUTAS

PROCEDIMIENTO DE ENRIQUECIMIENTO

1. Homogenizar la muestra.
2. Pesar 25 g de muestra y adicionar 225mL de CB con 4mL de suplemento 0,25% (1g de suplemento diluirlo con 40mL de agua estéril fría, no autoclavar).

Si son muestras con corteza de fácil desprender, pelarlas y pesar 25g de corteza y proceder igual que en paso 2.

1. Agitar por 15 segundos la solución.
2. Incubar a 41,5°C ± 1°C de 18 a 24 horas.

Si las muestras son de baja carga microbiana pase al paso 1 del procedimiento de hidratación,  en caso de encontrar una carga alta (> 10⁴ UFC/g) tomar 0,1mL de la solución 1 y pasarla a un tubo con 10mL de R-V-R10- e incubar a 41,5°C ± 1°C de 8 a 24 horas (revisar la Guía de interpretación de Salmonella Express).

PROCEDIMIENTO DE HIDRATACIÓN

1. Coloque la Placa petrifilm sobre una superficie nivelada y plana.
2. Con la pipeta perpendicular a la placa, coloque 2,0mL de diluyente estéril sobre el centro de la película inferior.
3. Deje caer suavemente la película superior sobre el diluyente para evitar atrapar burbujas de aire.
4. Coloque el difusor plano en el centro de la placa, presione ligeramente el centro del difusor para distribuir el diluyente de manera uniforme.
5. Espere al menos 1 hora a temperatura ambiente, con la película bajada, protegida de la luz, para que se forme el gel.

PROCEDIMIENTO DE INOCULACIÓN E INTERPRETACIÓN DE LA PLACA

1. Use un asa estéril de 10µL, y realice una sola siembra por estriado, desde la parte superior hasta la parte inferior de la placa, para obtener colonias aisladas.
2. Baje la película superior y aplique un movimiento suave de presión para retirar todas las burbujas de aire del área de inoculación.
3. Incube las placas a 41,5°C ± 1°C por 24 horas ± 2 horas.
4. No apilar más de 20 placas.

Las colonias:

• Rojas con zona amarilla y asociadas a burbuja de gas.
• Rojas con zona amarilla.
• Rojas asociadas a burbuja de gas, sin zona amarrilla

Son colonias presuntivas positivas.

Si desea confirmarlas, use el Disco de confirmación, incubando nuevamente a 41,5°C ± 1°C de 4 a 5 horas.

Colonias de Salmonella confirmadas con disco de confirmación:

1. Colonia azul oscuro/negra con precipitado azul.
2. Colonia azul oscura/negra con centro rojo oscuro y precipitado azul.

Los resultados se expresan como Ausencia / Presencia en 25 gramos de muestra.

(Revisar la Guía de interpretación de Salmonella Express).

BIBLIOGRAFÍA

• NTE INEN 1529-2:2013 Control microbiológico de los alimentos. Toma, envío y preparación de muestras para el análisis microbiológico.
• NTE INEN 776:2013 Carne y productos cárnicos. Muestreo.
• AOAC método oficial 2014.01.
• Guía de Interpretación Recuento de Salmonella Express.

En el amor del Señor Jesucristo mi Señor y Salvador, anhelo esto sea de bendición para tu vida. 

Pilas! Próximamente estas técnicas tendrán su vídeo tutorial.